L(+) LIFT – Безопасная формула полимолочной кислоты. Данные гистологического исследования
L(+) LIFT –
БЕЗОПАСНАЯ ФОРМУЛА
ПОЛИМОЛОЧНОЙ КИСЛОТЫ.
ДАННЫЕ ГИСТОЛОГИЧЕСКОГО
ИССЛЕДОВАНИЯ
На сегодня насчитывается более 500 теорий старения человеческого организма [1], и все они признают многофакторность данного процесса и связанные с ним структурные изменения кожи и подлежащих тканей. Эпидермальная дисфункция, снижение функциональной активности клеток и дезорганизация внеклеточного матрикса дермы [2], атрофия и дезорганизация жировых пакетов, их смещение, ослабление связок, резорбция хрящевых и костных структур, гипертонус мышц-депрессоров приводят к появлению на лице складок, борозд, зон депрессии, птозу мягких тканей, изменению контуров лица и шеи [3]. Основной причиной этого является прогрессивное снижение содержания основных структурных элементов внеклеточного матрикса (коллагена, эластина, гликозаминогликанов) и изменение их характеристик [4]. Одной из наиболее безопасных и эффективных малоинвазивных эстетических процедур является использование различных биостимуляторов синтеза коллагена. Их эффективное применение с целью улучшения качества кожи лица способствует развитию новой тенденции, направленной на коррекцию различных областей тела. Стимуляторы коллагена, изначально разработанные для восстановления дефицита объемов лица, обладают хорошим профилем безопасности и эффективности, что позволяет использовать их для решения различных косметологических проблем, таких как потеря
объема, дряблость кожи, липодистрофия, стрии и морщины [5]. По результатам глобального опроса, ежегодно проводимого Международным обществом эстетической пластической хирургии (ISAPS), число нехирургических процедур, выполненных в 2020 г., составило 14400347 случаев. Из них большую часть (10610748 случаев – 73,7%) занимали инъекционные методы. При этом за период с 2016 по 2020 г. наиболее существенное увеличение продемонстрировали методы инъекционной коллагеностимуляции: число процедур с применением гидроксиапатита кальция увеличилось на 35,1%, а с применением препаратов полимолочной кислоты – на 52% [6]. Таким образом, одним из наиболее перспективных и развивающихся направлений инъекционной косметологии является имплантация препа
Функции молочной кислоты и ее полимера в организме, применение в медицине
В нашем организме молочная кислота (лактид, 2-гидроксипропановая кислота, LA) образуется постоянно и участвует во многих обменных процессах. Молочная кислота служит энергетическим субстратом и оказывает влияние на метаболическую функцию клеток. Из-за своего небольшого размера она
может проникать через липидную мембрану клеток посредством челночной системы белков-транспортеров монокарбоксилатов, или «лактатных челноков». Последние исследования показывают, что лактат служит ключевым компонентом обменных процессов, он образуется и непрерывно используется в различных клетках. Концепции «клетка-клетка» и «внутриклеточный лактатный челнок» описывают роль лактата в доставке окислительных и глюконеогенных субстратов, а также в передаче клеточных сигналов. Наличие лактатных челноков приводит к осознанию того, что гликолитический и окислительный пути следует рассматривать как связанные, а не как альтернативные процессы.
Также было показано, что полимолочная кислота обладает антиоксидантными свойствами, которые могут служить для защиты клеток от повреждения, вызванного свободными радикалами. Оказывая влияние на регуляцию окислительно-восстановительного потенциала клеток, аллостерического связывания и перепрограммирования хроматина путем лактилирования остатков лизина на гистонах, лактат играет большую роль в распределении энергии в клетках, выполняя метаболические (окислительное топливо) и регуляторные или сигнальные функции. Считается (Джордж Брукс, 2020), что изменение концентрации лактата в ткани оказывает быстрое и значительное воздействие на окислительно-восстановительный потенциал клеток и другие системы контроля [7].
Важной особенностью L-формы полилактида является безопасность и прогнозируемая биодеградация в биологических тканях. Первоначально полимолочная кислота применялась в медицине в виде хирургических нитей, фиксационных стержней и костных штифтов, впоследствии области ее применения значительно расширились. В косметологии инъекционные имплантаты на основе L-формы полилактида применяются около 20 лет, и в настоящее время накоплен большой опыт эффективного и безопасного их использования [8].
По сравнению с традиционными дермальными наполнителями (филлерами) имплантаты на основе полимолочной
кислоты обладают эффектом биологической стимуляции, усиливая синтез эндогенного коллагена и активизируя работу дермальных фибробластов после инъекции. Стимулирующее влияние PLA достаточно выражено и сохраняется в течение двух и более лет [7].
Важные характеристики препаратов на основе полимолочной кислоты, обусловливающие их качество
В составе всех известных зарегистрированных на территории РФ препаратов полимолочной кислоты, используемой в косметологии, находится синтетический полимер из группы альфа-оксикислот, биосовместимый, биодеградируемый и полностью элиминирующийся из организма. Но, хотя действующее вещество практически одно, а процесс производства разный, свойства полимеров отличаются друг от друга, что неизбежно влияет как на практическую составляющую применения продукта, так и на конечный клинический результат
На выраженность и длительность биологического ответа со стороны кожи и ПЖК на имплантируемый материал из PLA влияет ряд факторов: состав полимера – лево- или правовращающийся изомер, молекулярная масса молекулы, размеры микрочастиц, качество рабочей суспензии, область и глубина имплантации.
Изделия, выполненные из полиL-молочной кислоты, подвергаются длительному ферментативному гидролизу в биологических тканях, продолжительность которого может достигать, по разным литературным данным, от 24 месяцев (микрочастицы размером 10–200 мкм) [9] до 7 лет (штифты, пластины) [10, 11]. А это означает, что время эффективного действия будет соответствовать времени полной биодеградации. D-молочная кислота расщепляется в организме от 3 недель до 3 месяцев и обладает коротким стимулирующим эффектом [12]. Биологический ответ тканей на имплантацию микрочастиц полимолочной кислоты изучен и понятен и представляет
собой два параллельно протекающих процесса: субклиническое воспаление и реакция на инородное тело, которым выступает сама микрочастица полимолочной кислоты. После имплантации PLA происходит медленный, но постоянный гидролиз полимера, промежуточным продуктом которого является молочная кислота. Накопление молочной кислоты приводит к закислению межклеточного вещества и, таким образом, поддерживает субклинический воспалительный процесс до тех пор, пока последняя микрочастица полилактида не будет разрушена. Признаки воспаления стихают к 6-му месяцу и завершаются накоплением коллагена III типа. Вместе с тем в участках нахождения имплантата наблюдается очевидная реакция на инородное тело, которая гистологически подтверждается присутствием многоядерных гигантских клеток инородных тел, тучных клеток, макрофагов, лимфоцитов. Уже в первый месяц после имплантации вокруг микросфер полимолочной кислоты формируется фиброзная капсула, а с 6-го месяца наблюдается формирование и накопление коллагена I типа [13].
Формирование нового коллагена приводит к утолщению кожи. Исследование, проведенное Mest D.R. и соавт. в 2006 г., продемонстрировало увеличение толщины кожи на 65,1% по сравнению с исходным уровнем, причем эффект сохранялся не менее 12 месяцев [14].
Соотношение микрочастиц разного размера в составе одного препарата также имеет большое влияние как на выраженность клинического эффекта, так и на его длительность. Микрочастицы маленького размера, менее 10 мкм, быстро элиминируются из организма при участии макрофагов и, соответственно, не окажут никакого биологического эффекта. Более крупные частицы, свыше 100 мкм, могут вызвать избыточное образование коллагена, что повышает риски среднесрочных и отдаленных нежелательных явлений и осложнений. Эффективными и безопасными считаются частицы размером от 30 до 70мкм.
Большое значение для качества рабочей суспензии имеет способ ее приготовления. Для восстановления сухого вещества PLLA используется стерильная вода для инъекций, а в качестве
местного анестетика – лидокаин [15]. Нарушение правил приготовления суспензии может привести к изменению заряда на поверхности микрочастиц, их преципитации и оседанию, что сделает препарат непригодным для дальнейшего применения, а в случае имплантации такого материала может привести к развитию нежелательных явлений.
В связи с этим практикующий специалист должен владеть информацией не только о химической формуле полилактида и диапазоне размеров микрочастиц «от и до», но и иметь представление о соотношении частиц разного размера в составе готового продукта, времени приготовления и хранения раствора. Это позволит повысить прогнозируемость эффективности процедур и снизить риски нежелательных явлений и осложнений [12].
Препарат L(+) LIFT: формула, позволяющая добиться максимальной эффективности и качества
Компания SNA представила новый продукт полимолочной кислоты с усовершенствованной формулой L(+) LIFT (РЗН 2023/20054 от 14 апреля 2023 г.) (рис. 1).
Он производится компанией PINE BM – крупнейшим концерном в Южной Корее по производству материалов и изделий для пластической хирургии и косметологии. Компания PINE BM была создана в январе 2011 г. и стала пионером на рынке шовных материалов в Корее. Продукция Pine BM известна своим превосходным качеством и экспортируется в более чем 30 стран мира, включая США, Европу, Ближний Восток и Юго-Восточную Азию. Эта современная производственная площадка организована в соответствии с международными стандартами осуществления фармацевтической деятельности ISO и EU GMP. Научнопроизводственный комплекс оснащен самым современным роботизированным оборудованием, на каждом этапе производится тщательный контроль производственного процесса. Большой опыт выпуска специализированных ме-
дицинских материалов позволил разработать собственную уникальную технологию производства препарата на основе L-формы молочной кислоты. В состав изделия входит только левовращающийся изомер молочной кислоты – 250 мг и 500 мг, натрия карбоксиметилцеллюлоза – 57,5 (115) мг. Само вещество полимолочной кислоты представляет собой гидрофобный полимер, нерастворимый в воде, а карбоксиметилцеллюлоза гидрофильна. В тканях с течением времени PLLA в ходе неферментативного гидролиза распадается на мономеры молочной кислоты,
которые, в свою очередь, метаболизируются до углекислого газа и воды. Таким образом, благодаря разработке и внедрению новой технологии производства удалось создать эффективную и безопасную формулу продукта полимолочной кислоты со следующими важными характеристиками: идеальная сферическая форма микрочастиц оптимального для выраженной стимуляции коллагена размера 30–60 мкм и молекулярной массы 200 000–280 000 Да (рис. 2).
Время приготовления рабочей суспензии сокращено до 15 минут, при
этом мы получаем стабильный гелеобразный раствор со сроком хранения 72 часа, который не выпадает в осадок при различных разведениях, позволяет использовать в работе иглу и канюлю и равномерно распределяется в тканях, обеспечивая комфортный и предсказуемый период реабилитации для пациента (рис. 3).
Актуальность исследования
В настоящее время имеется очень мало публикаций по изучению гистологического ответа тканей на имплантацию полимолочной кислоты, хотя препаратов разных производителей, ее содержащих, появляется все больше и больше. Поэтому компанией SNA Beauty было инициировано гистологическое исследование на кроликах с целью исследования гистопатологических реакций на имплантат препарат L(+) LIFT 500 мг, имплантированный в мышцу кролика на срок 90 дней в соответствии с ISO 10993-6.
Материалы и методы
Клиническое исследование проводилось на базе лаборатории компании Pine BM Co., LTD., Республика Корея. Испытание проводили методом имплантации трансплантата на 9 новозеландских кроликах-альбиносах, самцах, которым паравертебрально с правой стороны были выполнены 4 подкожные имплантации исследуемого вещества, по 1,0 мл на расстоянии около 1 см между уколами. Таким же образом были выполнены инъекции физиологического раствора с левой стороны для контрольного тестирования. Чувствительность паравертебральной зоны была снижена при помощи хлористого этила. Кролики, использованные в исследовании, были отобраны случайным образом из подходящих животных непосредственно перед началом исследования.
Всех животных содержали в условиях вивария, эксперименты были проведены в соответствии с положением Европейской конвенции по защите позвоночных животных, используемых в экспериментальных и других научных
целях (Страсбург, 1986), Директивы Совета Европы 86/609/ЕЭС (1986). Животных выводили из опыта путем передозировки эфирного наркоза (экспозиция 5–7 минут) через 4 недели (3 особи), 12 недель (3 особи), 26 недель (3 особи).
Животные были осмотрены через 24, 48 и 72 часа для выявления какоголибо токсического эффекта.
Никаких изменений, связанных с наличием исследуемого образца, при оценке клинических признаков выявлено не было: смертность отсутствовала; изменений в массе тела и в генерализированных данных также выявлено не было.
После проведения общего наблюдения места имплантации у кроликов вырезали. Участки исследуемого и контрольного образцов у каждого из кроликов удаляли путем осторожного надрезания вокруг места имплантации. Иссеченные участки имплантатов исследовали макроскопически с использованием увеличительного стекла, но без применения чрезмерных инвазивных процедур, которые могли бы нарушить целостность этой ткани для гистопатологической оценки. В период наблюдения ни в одном месте имплантации не были обнаружены признаки эритемы, отека, воспаления, инкапсуляции, кровоизлияния, некроза как
T = испытуемый участок, C = контрольный участок
в исследуемых, так и в контрольных образцах.
Для микроскопического наблюдения каждую из тканей помещали в отдельные и должным образом маркированные флаконы, содержащие 10%-й нейтральный забуференный формалин. После фиксации в формалине ткани заливали парафином с помощью вакуумного процессора для инфильтрации (SHANDON, Citadel 2000). Срезы парафиновых блоков размером 4 мкм изготавливали на микротоме (LEICA Autostainer XL, LEICA, Германия). Затем подготавливали гистопатологические препараты окрашенных гематоксилином и эозином срезов. Предметные стекла исследовали под микроскопом (табл. 1).
Результаты
При проведении микроскопии на исследуемых и контрольных образцах наблюдались:
через 4 недели со стороны исследуемого образца – наличие исследуемого вещества, слабовыраженная воспалительная продуктивная реакция, вокруг микросфер полимолочной кислоты формируется фиброзная капсула. С контрольной стороны – клеточный состав без изменений и без признаков воспалительной инфильтрации (рис. 4);
через 12 недель зоны введения исследуемого материала в виде слегка азурофильных долек, окруженных
Рис. 4. Участок гиподермы кролика, исследуемый образец через 4 недели (А): наблюдаются слабовыраженная воспалительная продуктивная реакция (1); фиброзная капсула (2). Участок гиподермы кролика, контрольная сторона (Б) Окраска гематоксилином и эозином, увеличение x200
Рис. 5. Участок гиподермы кролика, исследуемый образец через 12 недель (А): наблюдаются азурофильные дольки (1); новообразованные сосуды (2); разрастание коллагеновых волокон (3). Участок гиподермы кролика, контрольная сторона (Б). Окраска гематоксилином и эозином, увеличение x200
Рис. 6. Участок гиподермы кролика, исследуемый образец через 26 недель (А). Наблюдаются коллагеновые волокна (1); клетки фибробластического ряда (2). Окраска гематоксилином и эозином, увеличение x200
Таблица 2. Макроскопические данные о местах имплантации у кроликов (индивидуальные данные)
Таблица 2 (продолжение). Макроскопические данные о местах имплантации у кроликов (индивидуальные данные)
T = испытуемый участок, C = контрольный участок. 0 = какие-либо реакции отсутствуют, 1 = легкая реакция, 2 = умеренная реакция, 3 = тяжелая реакция. * Шкала оценок
капиллярной неоваскуляризацией, инфильтраты локализовались на участках разрастания соединительнотканных волокон с вновь образованными тонкостенными сосудами. Контрольные образцы абсолютно интактны, без изменений (рис. 5);
через 26 недель с правой стороны, где имплантирован исследуемый образец, коллагеновые волокна хорошо дифференцировались, волокнистый компонент преобладал над клетками фибробластического ряда. С левой контрольной стороны клеточный ряд без
изменений, волокнистые структуры сохранились на исходном уровне (рис. 6).
Реакции тканей, соседних с исследуемыми и контрольными участками, не отличались при сравнении. Заключение по рейтингу раздражающего действия в отношении исследуемых образцов было рассчитано как «0» (табл. 2). Таким образом, исследуемый продукт (имплантат L(+) LIFT 500 мг) не оказал раздражающего воздействия в условиях проведения данного испытания и не спровоцировал кожную реактивность.
И в заключение
Получены объективные данные стимулирующего действия PLLA L(+) LIFT на пролиферацию фибробластов и синтез коллагена посредством индуцирования воспалительного ответа с минимальным риском возникновения иммунных реакций. Исследуемый продукт удовлетворяет требованиям стандарта UNI EN ISO 10993-6:2004 и может быть рекомендован к практике врачам-косметологам в качестве коллагеностимулирующей терапии дермы и ПЖК.